【摘 要】
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黄瓜是硅积累较高的双子叶植物,但其硅吸收的分子机制尚不清楚.本研究中克隆了黄瓜硅转运体基因CsLsi6,并对其功能进行了初步分析.该研究将为阐明黄瓜硅吸收的分子机理奠定基础.以水稻的OsLsi6为基础,通过同源克隆获得黄瓜硅转运体基因CsLsi6,并利用生物信息学手段分析该蛋白的特点.利用荧光定量PCR技术对该基因进行组织表达谱分析.利用黄瓜原生质体瞬时表达进行该蛋白的亚细胞定位.CsLsi6的硅
【机 构】
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西北农林科技大学园艺学院,陕西杨凌712100
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黄瓜是硅积累较高的双子叶植物,但其硅吸收的分子机制尚不清楚.本研究中克隆了黄瓜硅转运体基因CsLsi6,并对其功能进行了初步分析.该研究将为阐明黄瓜硅吸收的分子机理奠定基础.以水稻的OsLsi6为基础,通过同源克隆获得黄瓜硅转运体基因CsLsi6,并利用生物信息学手段分析该蛋白的特点.利用荧光定量PCR技术对该基因进行组织表达谱分析.利用黄瓜原生质体瞬时表达进行该蛋白的亚细胞定位.CsLsi6的硅转运活性利用爪蟾卵母细胞表达系统进行.将GFP基因序列融合在CsLsi6碳端并在CsLsi6启动子区域(2 000 bp)启动下转化黄瓜后对绿色荧光进行观察,分析CsLsi6的细胞定位.CsLsi6基因位于黄瓜3号染色体上,CDS长786 bp,编码一段261的肽链.CsLsi6属于水孔蛋白家族中NIP亚家族的一员,具有6个保守的跨膜结构域.该蛋白中还存在与硅吸收相关的NPA保守结构域和由甘氨酸-丝氨酸-甘氨酸-精氨酸残基组成的选择性滤器.组织表达分析表明,CsLsi6主要在黄瓜茎部和根部表达.CsLsi6主要定位于细胞质膜上.CsLsi6在爪蟾卵母细胞中表达后表现出对硅的内向转运活性,且该转运活性不受低温条件的影响.CsLsi6主要在黄瓜根尖表达,并且主要定位于根部表皮细胞的远心端.这些研究表明,CsLsi6是黄瓜的硅转运体,在黄瓜硅吸收中起着重要的作用.
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