【摘 要】
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目的：表达并纯化羊布鲁菌OMP22蛋白,制备其单克隆抗体(mAb).方法：采用GST亲和层析纯化的方法纯化OMP22蛋白.用灭活的羊布鲁菌M5株免疫小鼠,将小鼠脾细胞与骨髓瘤Sp2/0细胞融合,用纯化的OMP22蛋白ELISA间接法筛选阳性克隆,3次克隆化后建立杂交瘤细胞系.采用小鼠腹腔接种杂交瘤细胞制备腹水,正辛酸-硫酸铵法纯化mAb.采用Western-blot、ELISA以及表位相加试验等方
【机 构】
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第四军医大学微生物学教研室,西安 710032
【出 处】
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第三届中国临床微生物学大会暨微生物学与免疫学论坛
论文部分内容阅读
目的：表达并纯化羊布鲁菌OMP22蛋白,制备其单克隆抗体(mAb).方法：采用GST亲和层析纯化的方法纯化OMP22蛋白.用灭活的羊布鲁菌M5株免疫小鼠,将小鼠脾细胞与骨髓瘤Sp2/0细胞融合,用纯化的OMP22蛋白ELISA间接法筛选阳性克隆,3次克隆化后建立杂交瘤细胞系.采用小鼠腹腔接种杂交瘤细胞制备腹水,正辛酸-硫酸铵法纯化mAb.采用Western-blot、ELISA以及表位相加试验等方法鉴定mAb特性.结果：经亲和层析纯化,获得纯化OMP22蛋白；Western-blot检测结果显示所获蛋白可与兔抗布鲁菌阳性血清特异性反应.获得2株mAb,分别命名为1A5、2D8.结论：获得了纯化的OMP22蛋白；制备了2株BCSP31特异性mAb,即1A5、2D8.OMP22蛋白的纯化及其mAb的制备为布鲁菌病的诊断与防治奠定了一定的物质基础.
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