美人蕉黄斑驳病毒的巢式PCR检测

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美人蕉黄斑驳病毒(Canna yellowr mottle virus,CaYMV)属于花椰菜花叶病毒科(Caulimoviridae)、杆状DNA病毒属(Badnavirus)成员,基因组为环状双链DNA,病毒粒体呈杆状,大小约120-130 nm×28nm。CaYMV侵染美人蕉后引起叶脉黄化、叶片产生褪绿斑、茎杆和花上出现条斑等症状,危害美人蕉的正常生长,影响其观赏价值和经济价值。CaYMV最早发现于日本美人蕉上,主要分布在日本和美国,近年来意大利、荷兰等国家也有发生的报道。目前,我国尚无该病毒发生的正式报道。本研究以福建口岸截获的美人蕉病株为材料,根据已报道的CaYMV基因序列设计了2对特异性引物(引物对Ⅰ和Ⅱ),应用普通PCR分别扩增出与预期大小相符的特异性条带,其中以引物对Ⅰ的扩增效率和特异性较好。在此基础上,利用引物对Ⅰ和Ⅱ进行2轮PCR扩增,并通过反应条件优化,成功建立了巢式PCR快速检测CaYMV方法,其灵敏度和特异性明显高于普通PCR。巢式PCR扩增产物经克隆、测序分析,结果证实与GeneBank中已报道的CaYMV序列一致。本研究建立的巢式PCR检测方法灵敏、特异,可用于美人蕉黄斑驳病毒的快速诊断。
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