【摘 要】
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目的 探讨RhoT1基因在胰腺癌发生、发展过程中的作用,为胰腺癌的早期诊断和靶向基因治疗提供新的思路.方法 通过RT-PCR方法检测转移胰腺腺癌细胞(AsPC-1)、原位胰腺腺癌细胞(Bxpc-3)、Capan2、人胰腺导管癌细胞(CFPAC-1)、JF305、PANC-1和SW1990细胞系中RhoT1 mRNA的表达水平.采用Western印迹法检测上述细胞系中RhoT1蛋白的表达情况.利用免
【机 构】
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200120 上海,同济大学附属东方医院老年医学科 同济大学东方转化医学研究中心
【出 处】
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The 14th Congress of Gastroenterology China(第十四届全国消化系病学术会议)
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目的 探讨RhoT1基因在胰腺癌发生、发展过程中的作用,为胰腺癌的早期诊断和靶向基因治疗提供新的思路.方法 通过RT-PCR方法检测转移胰腺腺癌细胞(AsPC-1)、原位胰腺腺癌细胞(Bxpc-3)、Capan2、人胰腺导管癌细胞(CFPAC-1)、JF305、PANC-1和SW1990细胞系中RhoT1 mRNA的表达水平.采用Western印迹法检测上述细胞系中RhoT1蛋白的表达情况.利用免疫细胞化学方法(ICC)对上述细胞系进行染色,观察RhoT1蛋白在细胞中的表达及定位情况.设计合成RhoT1小于扰RNA(siRNA),并通过脂质体LipofectamineTM 2000介导的方法转染胰腺癌细胞系SW1990,静默RhoT1基因的表达；分别于转染后48、72 h提取细胞总RNA及蛋白,利用RT-PCR方法及Western印迹法检测转染前后RhoT1 mRNA及蛋白表达水平的变化,以判断转染效率.利用CCK-8增殖实验检测不同时间点SW1990细胞系活性的变化,绘制生长曲线,分析RhoT1基因对SW1990细胞系增殖能力的影响.结果 RT-PCR及Western印迹法检测显示,RhoT1 mRNA及蛋白在胰腺癌AsPC-1,Bxpc-3,Capan2,CFPAC-1,JF305,PANC 1和SW1990细胞系中均高表达.免疫细胞化学显示,RhoT1在上述胰腺癌细胞胞质中强表达.转染后,SW1990细胞系中RhoT1蛋白及RNA的表达水平低于对照组.CCK8增殖实验显示,RhoT1表达下调组SW1990细胞增殖速率较对照组降低,细胞生长受到明显抑制(P＜0.05).结论 多种人胰腺癌细胞系中均存在RhoT1的高表达,且RNA干扰技术能有效抑制胰腺癌细胞系SW1990中RhoT1mRNA及蛋白的表达,RhoT1表达下调可抑制SW1990细胞系增殖,提示RhoT1基因在胰腺癌发生、发展中有重要作用,为胰腺癌的诊断和治疗提供潜在靶点.
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