斑马鱼胚胎胶质瘤模型建立及VEGF的诱导作用

来源 :广东省医师协会第五届神经内科医师大会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:cnars
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  目的 借助斑马鱼胚胎建立神经胶质瘤模型以研究神经胶质瘤体内生化分子机制,并可以高效的进行抗肿瘤药物的筛选.利用此种模式生物研究神经胶质瘤新的分子作用靶标,为神经胶质瘤的治疗寻找新的突破.方法 首先使用细胞生物学方法建立荧光标记的胶质瘤细胞系,去内毒素红色荧光质粒pcDNA3.0+DsRed的扩增及其线性化处理,去内毒素质粒小提试剂盒提取pcDNA3.0+DsRed质粒.使用线性化的pcDNA3.0+DsRed质粒转染人胶质瘤细胞系U87,并使用线性化的pcDNA3.0空质粒作为对照.接着使用显微注射法将胶质瘤细胞移植入斑马鱼体内,最后使用原位杂交、荧光定量RT-PCR、血管内源性碱性磷酸酶染色及荧光显微镜直接观察转基因鱼等方法检测相关分子变化情况.结果 我们成功的建立了斑马鱼神经胶质瘤模型,并发现人胶质瘤细胞可以在斑马鱼胚胎体内存活、增值、迁移并诱导血管增生等现象.最后我们在分子生物学层面上进一步研究了人胶质瘤细胞诱导斑马鱼肠下血管增生的分子机制.发现人胶质瘤细胞U87可以通过诱导斑马鱼VEGFAa的过表达,进一步促进VEGF Aa的受体VEGFR2 (VEGFR2)的表达,从而诱导斑马鱼肠下血管增生.结论 斑马鱼是一种新的研究肿瘤体内发展情况的模式生物并具有着自己很多独特的优点.人胶质瘤细胞在斑马鱼体内与整个系统发生互作,可以在其体内增值,扩散,并通过诱导分泌斑马鱼血管内皮生在因子(VEGF)而促进斑马鱼肠下血管增生.
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