【摘 要】
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为鉴定鸭坦布苏病毒(DTMUV)E蛋白的抗原表位,本研究以纯化的抗DTMUV E蛋白单克隆抗体(mAh)3B6为固相筛选分子,利用噬菌体表面展示技术,通过结合、洗脱、扩增的顺序筛选噬菌体
【机 构】
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中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室
【出 处】
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中国畜牧兽医学会生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第十二次学术研讨会
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为鉴定鸭坦布苏病毒(DTMUV)E蛋白的抗原表位,本研究以纯化的抗DTMUV E蛋白单克隆抗体(mAh)3B6为固相筛选分子,利用噬菌体表面展示技术,通过结合、洗脱、扩增的顺序筛选噬菌体随机12肽库,确定出DTMUV E蛋白模拟表位的氨基酸序列.设计合成针对表位的寡核苷酸序列,与GST蛋白融合表达进行Weslern-Blot分析,成功鉴定出了DTMUV E蛋白的一个线性抗原表位374EVEPPFG380.通过对DTMUV以及黄病毒属几种病毒E蛋白序列之间的比对,结果显示鉴定出的线性抗原表位在DTMUV中具有高度的保守性,无氨基酸位点的差异,且在其他黄病毒中也具有一定的同源性.利用Dot-Bloltting方法验证了该表位与DTMUV阳性血清具有良好的亲和性,同时该抗原表位与寨卡病毒(ZIKV)、登革热病毒(DENV)、日本乙型脑炎病毒(JEV)、西尼罗河病毒(WNV)、黄热病度(YFV)阳性血清具有交叉反应性.因此该表位可能为黄病毒属所共有的一个线性抗原表位,这对了解坦布苏病毒及黄病毒属其他病毒E蛋白的抗原表位结构功能以及研制表位疫苗和诊断抗原等具有重要意义.
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