【摘 要】
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[目的]本研究以提高假交替单胞菌芳香基硫酸酯酶的热稳定性为目的,基于易错PCR对酶进行定向进化,获得热稳定性提高的突变酶.[方法]以含有假交替单胞菌野生型芳香基硫酸酯酶的重组质粒(pET-28a-ars)为模板,基于易错PCR的技术构建随机突变文库.利用定点突变和结构模建研究该芳香基硫酸酯酶热稳定性有效改造位点的微观结构变化与酶热稳定性之间的关系.[结果]从随机突变文库中筛选得到两个酶热稳定性提高
【机 构】
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集美大学食品与生物工程学院,福建厦门361021 集美大学食品与生物工程学院,福建厦门361021
【出 处】
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2016年中国水产学会水产品加工与综合利用分会学术年会
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[目的]本研究以提高假交替单胞菌芳香基硫酸酯酶的热稳定性为目的,基于易错PCR对酶进行定向进化,获得热稳定性提高的突变酶.[方法]以含有假交替单胞菌野生型芳香基硫酸酯酶的重组质粒(pET-28a-ars)为模板,基于易错PCR的技术构建随机突变文库.利用定点突变和结构模建研究该芳香基硫酸酯酶热稳定性有效改造位点的微观结构变化与酶热稳定性之间的关系.[结果]从随机突变文库中筛选得到两个酶热稳定性提高的突变体H260L和D84A/H260L,定点突变和酶热稳定性分析显示260位氨基酸残基是影响该芳香基硫酸酯酶热稳定性的关键氨基酸.对该位点的氨基酸残基进行饱和突变,并研究酶的热稳定性,发现H260L、H259F、H259Q、H259I和H259R这5个突变酶在55℃的半衰期分别为40、29、30、49和34 min,高于野生型(WT)在55℃的半衰期9min.微观结构分析发现,与WT相比,这5个突变酶的260位氨基酸残基与周围的残基形成的氢键数目增加了1个或2个,这些额外的氢键可能对突变体热稳定的提高起重要作用.另外,对于突变子H260L、H260F、H260Q和H260I,表面残基电荷-电荷相互作用预测对酶热稳定性的提高也具有一定的作用.[结论]260位氨基酸残基是影响假交替单胞菌芳香基硫酸酯酶热稳定性的关键残基.
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