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目的 最新研究表明,哺乳动物沉默信息调节因子Sir2家族成员SIRT6基因具有抗衰老作用,本文的目的是明确SIRT6基因是否与皮肤衰老相关的成纤维细胞的生长和胶原代谢有关,并探索其影响胶原代谢的机制;探讨慢性紫外线辐射是否会对抗衰老基因SIRT6产生影响.方法 RNAi沉默皮肤成纤维细胞SIRT6基因,real-time qPCR检测沉默效率,间接免疫荧光观察SIRT6基因沉默48h后细胞内SIRT6蛋白表达情况;MTT方法观察SIRT6靶向沉默后对细胞生长的影响;检测沉默后24小时、48小时、72小时间培养上清液中羟脯氨酸含量;基因沉默48小时后,real-time qPCR检测Ⅰ型前胶原、Ⅲ型前胶原、基质金属蛋白酶MMP1和MMP3转化生长因子TGF-B 1mRNA水平:采用ELISA方法检测基因沉默后培养上清液中基质金属蛋白酶MMP1、MMP3水平;沉默后48小时,免疫印迹法检测核转录因子NF-κ B P65的表达量;采用长波紫外线对皮肤成纤维细胞进行慢性照射,real-time qPCR检测紫外线对SIRT6 mRNA水平的影响,间接免疫荧光实验观察细胞核中SIRT6表达变化,免疫印迹实验测定慢性紫外线辐射对细胞核SIRT6蛋白的影响.结果 Real-time qPCR确认SiRNA1具有最强的沉默效应,沉默效率达80%以上差异具有统计学意义(P<0.01);间接免疫荧光观察显示成纤维细胞内SIRT6蛋白表达于细胞核内,SIRT6基因沉默后使细胞核内蛋白表达明显降低;SIRT6基因沉默24小时后,细胞生长受到明显抑制(P<0.01);沉默后72小时,羟脯氨酸的含量降低(P<0.01); SIRT6沉默48小时后,Ⅰ型前胶原mRNA水平显著下降(p<0.01),Ⅲ型前胶原mRNA水平也有所下降,但差异不明显(p>0.05),TGF-B 1虽较对照组有所升高,但差异不具有显著性意义(p>0.05),MPP1较对照组升高,但差异不具有统计学意义(p>0.05),MMP3较对照组升高,差异具有显著性意义(p<0.01);ELISA结果表明,SIRT6沉默48小时后,培养上清液中mmp1水平升高,差异具有显著性意义(P<0.05),培养上清液中MMP3水平却较对照组更低(P<0.01);免疫印迹实验表明SIRT6基因沉默后,NF-κ B活化,表现为细胞核内NF-κ B P65表达显著增加;慢性紫外线辐射可显著上调细胞中SIRT6 mRNA水平(P<0.01);紫外线慢性辐射后细胞核内SIRT6蛋白表达强于对照组;免疫印迹实验也证实紫外线辐射后细胞核内SIRT6蛋白表达强于对照组,但差异不明显(P>0.05).结论 SIRT6下降或缺失可能影响皮肤成纤维细胞的增长和胶原代谢,提示SIRT6在皮肤成纤维细胞衰老过程中具有重要意义;皮肤成纤维细胞SIRT6表达下降或缺失影响皮肤胶原代谢的机制更可能是通过NF-κ B途径影响胶原蛋白的合成和降解;长波紫外线慢性辐射增加了SIRT6基因的表达,推测为反应性上调SIRT6水平,表明SIRT6可能参与了DNA损伤修复,提示SIRT6具有抗皮肤光损伤或光老化的效应.本研究结果表明,SIRT6基因在皮肤成纤维细胞对抗自然衰老和光老化过程中具有重要的意义,以SIRT6基因为靶点研究可能为抗皮肤衰老的治疗开辟一条新途径.