【摘 要】
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将黑凤鸡新产蛋囊胚分离,物理消化,用生长培养基(M199,10％,FBS,2﹪,鸡血清,50μg/ml丙酮酸钠,50μg/ml庆大霉素)进行体外加盖片培养.每个培养皿(4个胚)为一个转染单位,用绿色荧光蛋白质粒pEGFP-C1通过脂质体LIPOFECTAMINE以贴壁细胞方式转染加盖片培养4h的BCs.最佳转染条件为:1.5μg质粒DNA,5μl(1mg/ml)脂质体,脂质体-DNA复合物形成时间
【机 构】
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湖南省畜牧兽医研究所(长沙) 捷克生物医药研究所(布拉格)
【出 处】
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中国畜牧兽医学会第十二次全国动物遗传育种学术讨论会
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将黑凤鸡新产蛋囊胚分离,物理消化,用生长培养基(M199,10％,FBS,2﹪,鸡血清,50μg/ml丙酮酸钠,50μg/ml庆大霉素)进行体外加盖片培养.每个培养皿(4个胚)为一个转染单位,用绿色荧光蛋白质粒pEGFP-C1通过脂质体LIPOFECTAMINE以贴壁细胞方式转染加盖片培养4h的BCs.最佳转染条件为:1.5μg质粒DNA,5μl(1mg/ml)脂质体,脂质体-DNA复合物形成时间为30min,转染时间为6h,加入1ml M199(20﹪FBS,4﹪鸡血清)后培养12h.用荧光显微镜(BH2-RFL),在B(Blue)激发区,激发滤片BP-490,增补激发滤片(EY-455或EY-475),双向分色镜为B(DM-500+0-515)的条件下,观察绿色荧光(激发波长455~490nm,荧光波长小于507nm),约有30﹪ BCs发绿色荧光.该方法同样适用于转染长沙黄鸡和"华星白"蛋鸡.
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