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目的复苏温度和时间是影响精子库长期冷冻保存精液质量的的重要因素之一。本研究针对不同复苏温度,探讨其对精子的复苏之后的活动力,以及不同温度对精子形态和DNA的完整性等参数的影响。材料与方法此研究按照上海交通大学医学院和仁济医院伦理委员会的要求,并且要求捐献者填写书面知情同意书。自2012年1月到5月,共采集54位志愿者的精液标本,捐献者年龄在22～45岁之间。禁欲3-5天后,志愿者通过手淫采集精液;室温下60 min内完全液化后,进行后续实验研究。精液涂片后,将剩余标本分成两等份,分别加入等量GEYC型冷冻保护剂,充分混匀再至于1.5ml到冷冻管中,分别编为A,B两组。采用气相快速冷冻方法储存5小时以上,进行快速复温。其中A组直接至于37℃水浴锅中5分钟,而B组采用两步法:先投入40℃水浴2分30秒,再放入37℃水浴2分30秒。采用西班牙SCA精液分析仪精确测量复苏后精液基本参数（包括前向运动精子比率和非前向运动比率）。正常形态和DNA完整性检测按照WHO推荐的Diff-Quick和SCD方法。所有数据经SPSS软件进行统计学分析和处理。结果精液复苏后,A组（直接37℃复温）前向运动精子比率为（22.0±12.1）%,B组（两步法复温）前向运动率为（28.2±14.5）%,两组之间进行student-T检验,P<0.05,差异具有统计学意义。而冷冻前后的DNA完整率和畸形精子发生率没有显著性差异,p>0.05。讨论与结论复苏温度和时间是精子库长期冷冻保存精液的重要因素。按照WHO5th的操作手册,精液经快速冷冻后,37℃复温3-5分钟,可以得到较高的精子活动力。然而,也有一部分研究支持提高复苏的温度。本研究通过上海市人类精子库部分捐精志愿者精子的小样本研究,初步提出两步法序贯复苏对提高精子活动力具有一定作用,是值得今后研究的策略。然而,何种复苏温度和时间对精子细胞损伤的最小,目前仍是缺乏详细的研究报道,对精子在复苏的低温生物学机理也十分匮乏,未来需要更深入的研究和分析。本研究采用的两步法复苏是一种有效的复苏方法 ,同直接37℃复温相比,提高了快速冷冻后精子复苏的前向运动比率。除此之外,两步法对精子的DNA和形态是没有影响。初步提示两步法可以作为精子复苏的优化方法 。