多肽在生命过程中扮演着重要的角色,对其生理生化功能的研究与应用,离不开对单一多肽物质的需求,而化学合成法是获取目标多肽的最有效方法之一.对合成产物的高效分离分析,是合成条件优化,以及实现高产率合成的重要保证.以两种内源性神经肽,甲硫氨酸脑啡肽和亮氨酸脑啡肽为模型对象,采用Fmoc固相多肽合成策略进行合成,通过HPLC-MS/MS对多肽合成粗产物进行快速分离与结构鉴定.研究结果显示，主要合成产物均为目标多肽，副产物主要包括C端丢失一个氨基酸所形成的四肽，以及由于甲硫氨酸残基氧化而形成的含甲硫氨酸亚砜的多肽。进一步分析表明，Wang树脂封闭不完全，末端存在游离的羟甲基，氨基酸偶联过程中C端第二位氨基酸除与第一位氨基酸的氨基形成酰胺键外，还直接与树脂上的羟甲基相连形成酯键，导致副产物残缺四肽的生成。通过提前使用乙酸酐封闭树脂能够降低该类型副产物的产生。对于含敏感氨基酸甲硫氨酸残基的多肽，裂解过程中，需保持无氧环境（氮气保护），裂解时间尽可能缩短，这将有效降低形成氧化产物的比例。本研究为多肽的快速分析与结构鉴定，以及合成条件优化，提高固相多肽合成产率提供了快捷的指导，同时为其他含敏感氨基酸的生理活性多肽的高效合成提供了借鉴。