【摘 要】
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目的:对重组乙肝VR1012/EHNⅡ/前C-C基因疫苗(VEC)中的蛋白酶切位点进行点突变,并通过动物试验研究突变型前C-C基因疫苗的免疫效果。方法:采用单引物二次PCR法对质粒VEC依次进行基因点突变,得到151+154(VE2)、151+154+164+167点突变(VE4)2种突变型疫苗,转染HepG2细胞并免疫Balb/c小鼠。通过细胞免疫化学、酶联免疫分析、免疫印迹、酶免疫斑点、细胞杀
【机 构】
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解放军第302医院 北京 100039 解放军第302医院 北京100039
【出 处】
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第三次全国免疫诊断暨疫苗学术研讨会
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目的:对重组乙肝VR1012/EHNⅡ/前C-C基因疫苗(VEC)中的蛋白酶切位点进行点突变,并通过动物试验研究突变型前C-C基因疫苗的免疫效果。方法:采用单引物二次PCR法对质粒VEC依次进行基因点突变,得到151+154(VE2)、151+154+164+167点突变(VE4)2种突变型疫苗,转染HepG2细胞并免疫Balb/c小鼠。通过细胞免疫化学、酶联免疫分析、免疫印迹、酶免疫斑点、细胞杀伤试验等方法检测其在HepG2细胞内的表达和诱导小鼠特异性体液、细胞免疫的情况。同时联合小鼠γ干扰素基因疫苗(Vγ)免疫小鼠,研究免疫效果。结果:VEC、VE2、VE4转染HepG2细胞9后均胞浆表达目的蛋白,产物分子量分别为P18、P20、P22左右,细胞裂解液HBeAg含量VE4、VE2N高于VEC,上清中则反之; 疫BALB/C小鼠,证实3种质粒均能引发特异性细胞免疫反应,VE4、VE2强于VEC;联合Vγ后特异性细胞免疫增强。结论:突变型前C-C基因疫苗可在真核细胞表达目的蛋白且免疫效果优于突变前。γ干扰素基因可作为基因佐剂增强HBVDNA疫苗诱导的特异性细胞免疫反应。
其他文献
目的:观察重组HBcAg与HBsAg联合(C+S)疫苗免疫BALB/C小鼠后体液免疫与细胞免疫的效果。方法:配制含Al(OH)佐剂与不含佐剂的抗原分别免疫BALB/C小鼠,酶联免疫方法(ELISA)测定抗体滴度;制备脾脏单个核细胞(MNC),ELISA法检测细胞因子分泌水平;应用流式细胞仪分析T细胞亚群。结果:HBcAg与HBsAg联合疫苗免疫小鼠产生IFN-γ量与二者单独免疫相比有显著性差异(P
本研究广州地区134名绝经后汉族妇女OPG基因启动子区T-C多态性等位基因频率分布符合Hardy-Weinberg遗传平衡定律.而基因型频率分布与高加索人种妇女差异有显著性,高加索人种妇女CC型基因型无论是骨质疏松组还是非骨质疏松组均明显高于汉族妇女,分别24.2％和22.9％,而汉族妇女两 者仅为8.2％和4.9％.而TT型基因型无论是骨质疏松组还是非骨质疏松组又低于汉族妇女.
目的:构建和表达乙肝表面抗原突变体用于HBsAg抗原性的深入研究。方法:利用定点突变技术构建HBsAg突变体,然后转化毕赤酵母GS115,菌落PCR、高浓度Zeocin抗性筛选鉴定转化子,SDS-PAGE检测表达蛋白,并进行ELISA和Western blot鉴定。结果:通过序列分析结果表明突变体构建成功,SDS-PAGE证明突变体能在毕赤酵母中有效表达,ELISA和Western blot表明H
目的:研究甲型肝炎病毒P1B、P2A、P3AB和P3D在原核系统中的表达,并探讨这些蛋白的抗原活性和作为诊断抗原的应用价值。方法:采用PCR方法,从克隆有HAV HM175株全长cDNA基因的克隆载体pHAV16H1上扩增出目的基因,以M47作为表达载体,构建N端带硫氧还蛋白的重组表达质粒。重组质粒在大肠埃希菌BL21(DE3)中经IPTG诱导表达。采用DEAE阴离子交换和镍离子柱螯和亲和层析纯化
目的:探讨乙肝疫苗长期免疫地区人群HBV流行规律的变化趋势。方法:整群抽样结合横断面调查,用固相放射免疫法检测研究对象血清HBV感染指标并进行分析。结果:(1)平均HBsAg阳性率为7.5％,0~19岁人群HBV感染指标显著低于≥20岁人群。(2)0~19岁人群HBsAg阳性率1985年高于2005年;1985年的抗-HBs水平随着年龄增长而升,从1-岁组的12.4％到60~岁组的53.8％,而2
目的:初步确定流行于山西地区的乙肝病毒的基因型的基本情况。方法:采集山西地区乙型肝炎表面抗原阳性的血清,利用PCR扩增得到HBV的S基因和C基因;用MEGA3软件对其进行核苷酸序列分析,构建系统发生树,分析基因型。结果:约93％样本的HBV S基因和C基因序列均位于HBV系统发生树的基因型C,近7％的样本其S基因和C基因序列位于系统发生树的基因型B。结论:流行于山西地区的乙肝病毒多数为基因型C,少
目的:标定乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)定量血清。方法:选择一份HBsAg阳性,抗-HBs、抗-HCV均为阴性的血清,以WH0表面抗原定量血清为标准,经4次独立标定,以双平行线法计算,得到待标定HBsAg定量血清的浓度。结果:经4次标定,标准血清浓度为5.56IU/ml,变异系数CV为5％,加速热稳定试验表明其抗原活性在-70℃可以稳定保存4年。用该份乙肝表面抗原定量血清评价国内外六家HBsA
本文通过对开封农村地区随机抽取的569名月龄在7-30个月的婴幼儿甲肝抗体流行病学研究。结果表明被调查婴幼儿7-10月时抗体阳性率均在30％以上,之后逐渐下降13-18月时降至最低之后缓慢上升。13-18月分别和7-10月、21-30月组间有统计学差异。提示该地区甲肝疫苗免疫的最佳时间应为13-18个月。
目的:构建携带HBVC基因的重组MVA假病毒颗粒,为进一步评价其作为基因治疗工具的价值奠定基础。方法:将HBVC基因通过基因重组构建入穿梭载体pSC11,得到质粒pSC11-C,将此质粒转染MVA病毒感染的原代鸡胚细胞单层,通过同源重组得到MVA-C,采用特异性PCR鉴定重组病毒。经过X-gal筛选,9次克隆传代得到单克隆重组病毒。将病毒培养物经蔗糖梯密度离心纯化后滴定病毒滴度。结果:采用PCR和
在检验工作中,经常会遇到溶血的标本,其对很多检验项目如r-GT,乳酸脱氢酶,K等的检验结果的影响已不容质疑,但对ELISA检测乙肝表面抗原是否有影响,虽然很多文献有报导,但说法不一致,本文对溶血标本对ELISA检测乙肝表面抗原是否有影响及标本溶血原因进行讨论交流。