人骨髓间充质干细胞成骨分化早期相关的长链非编码RNA的初步研究

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研究目的:筛选与人骨髓间充质干细胞(hMSCs)成骨分化早期相关的长链非编码(lncRNA),分析其对hMSCs成骨分化早期的影响。研究方法:以成骨诱导分化7天前后的hMSCs为研究对象,通过碱性磷酸酶(ALP)染色、茜素红染色及成骨特异性转录因子表达水平检测等方法对成骨分化进行鉴定。利用Agilent lncRNA芯片技术筛选出成骨诱导分化7天前后发生差异表达的lncRNA,并通过实时荧光定量PCR (RT-PCR)对芯片结果的准确性进行验证。研究结果:hMSCs经成骨诱导分化7天后,ALP染色及茜素红染色结果为阳性,RT-PCR检测成骨分化7天前后成骨特异性转录因子(ALP、OPN、Osterix)的表达变化,结果显示与hMSCs成骨分化前相比,成骨诱导分化7天后ALP、OPN、Osterix的表达明显增加,差异具有统计学意义(P<0.05)。lncRNA芯片筛选结果显示与成骨诱导分化前的hMSCs相比,成骨诱导分化7天后表达上调超过2倍的lncRNA分别有923条;下调超过2倍的lncRNA分别有993条;上调超过4倍的lncRNA分别有225条;下调超过4倍的lncRNA分别有120条;上调超过8倍的lncRNA分别有60条;下调超过8倍的lncRNA分别有17条。随机选取其中4个差异表达lncRNA,RT-PCR验证结果与芯片检测结果一致。研究结论:hMSCs早期成骨分化前后,lncRNA发生差异表达,提示这些差异表达的lncRNA可能与hMSCs早期成骨分化相关。
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