论文部分内容阅读
目的:通过硼替佐米(PS-341)直接孵育C57BL/6雄性小鼠的胸主动脉,以及硼替佐米腹腔注射给药C57BL/6小鼠后分离出小鼠胸主动脉,检测硼替佐米对小鼠胸主动脉功能性收缩的影响,通过检测胸主动脉收缩蛋白及其基因的表达情况,探索硼替佐米对小鼠胸主动脉收缩作用的机制。方法:1.采用Myography血管张力检测法检测小鼠血管收缩力。取C57BL/6雄性小鼠(6-8周龄)的胸主动脉剪成等长4段(约2 mm),分别置于用DMEM培养基配置的生理盐水、不同浓度硼替佐米(2 n M、20 n M、200 n M)中孵育24 h后,考察氯化钾(KCl)和苯肾上腺素(phenylephrine,PE)对血管收缩作用的影响;将C57BL/6雄性小鼠(6-8周龄),随机分为对照组和硼替佐米组,采用腹腔注射途径给药,实验组腹腔注射硼替佐米(0.1μg/g,每三天一次),对照组腹腔注射等体积生理盐水。给药4周后,检测硼替佐米对小鼠胸主动脉间接收缩作用的影响,同时采用小鼠尾动脉压法来测定小鼠心率及血压,观察硼替佐米对小鼠收缩作用是否对血压和心率造成影响。2.按照方法1中的硼替佐米腹腔注射小鼠分组及给药剂量,给药4周后,分离得到胸主动脉,通过检测蛋白免疫印迹实验来检测血管平滑肌中的α-肌动蛋白(SMα-actin)、钙调节蛋白(calponin)、平滑肌22α(SM 22)等收缩蛋白及myocardin蛋白的表达情况,同时通过荧光定量PCR法检测各收缩蛋白和myocardin的基因表达情况,初步探讨硼替佐米对血管收缩作用的机制。3.按照方法1中的硼替佐米腹腔注射小鼠分组及给药剂量,给药4周,给药前后分别称量小鼠体重,通过荧光多肽底物检测法检测给药4周后C57BL/6小鼠的胸主动脉糜蛋白酶活性,采用HE染色检测胸主动脉的形态学变化,考察硼替佐米对小鼠胸主动脉的作用效果及不良反应。结果:1.离体血管孵育实验表明,20 n M硼替佐米(P<0.05)和200 n M硼替佐米(P<0.01)可明显抑制C57BL/6小鼠胸主动脉的收缩功能。腹腔注射0.1μg/g硼替佐米干预4周后,无论是否去掉胸主动脉内皮层,硼替佐米对C57BL/6小鼠胸主动脉的收缩功能均有抑制作用(P均<0.05);对小鼠心率、收缩压(SBP)、舒张压(DBP)和平均动脉压(MAP)无明显影响。2.硼替佐米对小鼠胸主动脉的收缩蛋白(SMα-actin、calponin、SM 22)和myocardin蛋白表达均有下调作用(P均<0.05);对小鼠胸主动脉的收缩蛋白基因和myocardin基因表达亦均有下调作用3.硼替佐米对小鼠胸主动脉的糜蛋白酶活性有抑制作用(P<0.05);对小鼠胸主动脉的形态和小鼠体重均无明显影响。结论:硼替佐米能降低收缩蛋白(SMα-actin、calponin、SM 22)表达,抑制C57BL/6小鼠胸主动脉的收缩功能。其机制可能是通过下调myocardin的基因表达,导致myocardin蛋白表达减少,进而下调血管收缩蛋白而抑制血管平滑肌收缩功能。