【摘 要】
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目的:建立人膀胱癌CDDP耐药细胞株T24/CDDP,鉴定其生物学特性,并探讨其对CDDP耐药的机制。方法:采用CDDP浓度逐步递增联合大剂量CDDP冲击方法,在体外连续诱导、培养膀胱癌细
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目的:建立人膀胱癌CDDP耐药细胞株T24/CDDP,鉴定其生物学特性,并探讨其对CDDP耐药的机制。方法:采用CDDP浓度逐步递增联合大剂量CDDP冲击方法,在体外连续诱导、培养膀胱癌细胞株T24细胞,建立对CDDP耐药的细胞株T24/CDDP。CCK-8法测定T24/CDDP细胞对CDDP的耐药指数;绘制细胞生长曲线,计算细胞群体倍增时间;流式细胞术检测T24细胞和T24/CDDP细胞的细胞周期比例;Western blot测定细胞中PKCα和P-gp蛋白的表达。结果:T24细胞在体外采用CDDP浓度逐步递增联合大剂量CDDP冲击方法连续诱导、培养,历时11个月,成功建立了对CDDP耐药的细胞株T24/CDDP,其耐药指数为4.17。T24细胞和T24/CDDP细胞的群体倍增时间分别为(33.61±0.41)h和(39.94±0.63)h,二者比较差异有统计学意义(t=14.59,P=0.00)。与T24细胞相比,T24/CDDP细胞的S期细胞比例增加[(30.63±2.74)%vs(35.38±3.31)%],但差异无统计学意义(t=1.91,P=0.06)。G0/G1期细胞比例增加[(47.25±4.17)%vs(60.42±3.25)%],G2/M期细胞比例减少[(17.37±3.46)%vs(8.95±2.81)%],差异均有统计学意义(t=4.31,P=0.006;t=3.27,P=0.015)。T24细胞和T24/CDDP细胞中均有PKCα和P-gp蛋白的表达。与T24细胞相比较,T24/CDDP细胞中PKCα和P-gp蛋白表达水平均显著升高[(1.37±0.06)vs(3.12±0.11),t=24.19,P=0.00;(0.47±0.03)vs(1.98±0.08),t=30.61,P=0.00)]。结论:T24/CDDP细胞具有耐药表型及耐药细胞的生物学特性,其耐药机制可能与细胞中PKCα和P-gp蛋白的过度表达有关。
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