【摘 要】
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试验所用金定鸭来自国家水禽种质资源基因库(泰州)。根据GenBank上公布的鸭RIG-I序列设计引物，利用RT-PCR克隆鸭RIG-I基因CDS区，根据保守结构域预测结果，构建携带6*his组氨酸标
【机 构】
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扬州大学动物科学与技术学院,江苏扬州225009
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试验所用金定鸭来自国家水禽种质资源基因库(泰州)。根据GenBank上公布的鸭RIG-I序列设计引物，利用RT-PCR克隆鸭RIG-I基因CDS区，根据保守结构域预测结果，构建携带6*his组氨酸标签的不同结构域缺失突变体的真核表载体(RIG-I-Full,RIG-I-N和RIG-I-C)，转染鸡胚成纤维细胞DF1，经RT-PCR、间接免疫荧光方法鉴定重组质粒在细胞中转录与表达;同时利用RT-qPCR检测RLR抗病毒信号通路中的IFN-β,Mx1和PKR等下游基因的表达变化。鸭RIG-I基因CDS区全长2802bp(GenBank登录号:JQ946323.1)编码933个氨基酸。结构域预测显示氨基端含两个半胧天冬酶活化和募集结构域(CARDS: 2-90aa, 99-184aa)，梭基端包括RNA解旋酶( DEXDc:261-413aa;HELICc:607-742aa),ATP结合结构域(270-274aa,706aa,727aa,731aa,733aa),RNA结合结构域(636-639aa ,663-664aa, 698-700aa)以及抑制结构域的不同区段(RIG-I-Full,RIG-I-N和RIG-I-C)转染DF1细胞后，重组蛋白均在DFi细胞中正常表达;RT-qPCR结果显示，CARDS能显著激活RLR通路上IFN-β,Mxl及PKR基因的表达上调。研究也已证实鸭拥有完整起作用的RIG-I受体，在H5N1流感病毒感染时激活IFN-p的产生和下游抗病毒基因的表达，极少致病，而在鸡体内缺失这种RNA解旋酶，将鸭的RIG-I转人鸡胚成纤维细胞，是否能通过鸭RIG-I的CARI)引发的抗病毒免疫应答，目前未见研究。
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