【摘 要】
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为了阐明miR-21对鸭胸肌发育的调控作用,从表观遗传学的角度探讨鸭骨骼肌发育的调控机制,本课题组在前期利用鸭转录组mircroRNAs测序技术,发现miR-21在胚胎期第19天北京鸭胸肌内显著差异高表达于其他时期,且与骨骼肌发育正向调控因子MRF4和MyoG表达趋势一致,与负向调控因子MSTN表达趋势相反.因此,提出假设miR-21对鸭骨骼肌发育具有促进作用.为了验证上述假设,本文拟就鸭miR-
【机 构】
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海南省农业科学院畜牧兽医研究所,海南海口 571100 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所,北京10
【出 处】
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中国畜牧兽医学会家禽学分会第十八次全国家禽学术讨论会
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为了阐明miR-21对鸭胸肌发育的调控作用,从表观遗传学的角度探讨鸭骨骼肌发育的调控机制,本课题组在前期利用鸭转录组mircroRNAs测序技术,发现miR-21在胚胎期第19天北京鸭胸肌内显著差异高表达于其他时期,且与骨骼肌发育正向调控因子MRF4和MyoG表达趋势一致,与负向调控因子MSTN表达趋势相反.因此,提出假设miR-21对鸭骨骼肌发育具有促进作用.为了验证上述假设,本文拟就鸭miR-21的分子特征、组织和时空表达谱以及miR-21对鸭卫星细胞增殖与分化的影响进行深入研究.2材料与方法通过ClustalX软件和micro-brewer在线比对确定miR-21成熟序列及前体序列的保守性;应用qRT-PCR,研究miR-21在胚胎期北京鸭胸肌内及胚胎期第27天不同组织内的表达谱;通过细胞培养、过表达和干扰miR-21,结合qRT-PCR、WB、EdU检测、流式细胞术、免疫荧光等技术检测和探索miR-21对鸭卫星细胞增殖和分化的影响.3结果与讨论通过序列比对,发现miR-21高度保守,和其亲缘关系最近的为原鸡,其次是火鸡和斑胸草雀.miR-21高表达于胸腿肌组织、肝脏和肌胃组织;时序表达谱显示miR-21在胚胎期第19天表达量最高,胚胎发育初期和结束期表达量都较低.分离和培养鸭卫星细胞,并转染miR-21模拟物和抑制物,qRT-PCR、WB、EdU及流式细胞术检测发现miR-21促进鸭卫星细胞的增殖;qRT-PCR、WB及免疫荧光检测结果显示miR-21具有促进鸭卫星肌管形成的作用.对miR-21的研究目前主要集中在其对癌细胞增殖的影响方面,对正常发育的细胞尤其是骨骼肌细胞研究的还很少,本研究结果与Zuo等(2015)在猪骨骼肌和白立景(2014)在小鼠成肌细胞上的研究一致,在禽类上为首次研究.
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1引言人们已经证实在哺乳动物中,非酒精性脂肪肝与胰岛素抵抗(IR)密切相关,且经过IGF(胰岛素样生长因子)处理后的二型糖尿病人,其对胰岛素的敏感性增加,血糖控制得到提高.本课题组前期研究发现,IR参与了鹅肥肝的形成,并通过转录组测序发现IGF家族中IGFBP2基因在填饲后肝脏中的表达量极显著降低.IGFBP2主要在肝脏中合成,研究填饲对IGFBP2与IR及脂肪沉积之间的作用,将有助于阐述鹅肥肝及
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