吴茱萸碱抗炎机制的初步研究

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目的体外研究吴茱萸碱的抗炎效应及其作用机制。方法本研究先用酵母多糖刺激RAW264.7细胞株。细胞经不同浓度的吴茱萸碱(25μM,50μM,100μM)预作用1h后,加入100μg/ml酵母多糖并作用6h。分别通过荧光定量PCR和ELISA方法检测炎症因子IL-6、TNF-α和IL-1β的mRNA以及蛋白水平。为了进一步探究吴茱萸碱的分子作用机制,收集酵母多糖与吴茱萸碱联合作用1h的细胞团块,并通过ELISA和Western blot方法检测NF-κB p65的DNA结合活性以及NF-κB相关信号通路分子的蛋白表达水平,同时利用免疫荧光检测NF-κB p65入核情况。结果与酵母多糖单独处理组相比,吴茱萸碱能够有效降低IL-6、TNF-α和IL-1β的mRNA和蛋白水平(P<0.01),并且呈现浓度梯度依赖性;在1h时,吴茱萸碱能显著下调NF-κB p65的DNA结合能力(P<0.05)。Western blot和免疫荧光结果显示吴茱萸碱并不能抑制MAPKs家族(ERK,JNK,p38)的活化,但是可显著降低胞核中p65的含量及其磷酸化水平,同时吴茱萸碱对IκBα蛋白的降解以及IκBα磷酸化具有抑制作用。结论吴茱萸碱具有明显的抗炎效应,而此作用是通过下调IκBα磷酸化水平,阻止IκBα蛋白的降解,进而阻抑NF-κB p65入核来实现的。
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