【摘 要】
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根据柔嫩艾美耳球虫顶体膜抗原1(EtAMAl)基因的ESTs序列,利用RACE技术扩增获得其全长序列(2349bp,Genbank登录号:JN032081).该序列含有一个1608bp的开发性阅读框,编码535个氨
【机 构】
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中国农业科学院上海兽医研究所,农业部动物寄生虫学重点实验室,上海200241
【出 处】
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上海市畜牧兽医学会2013年学术年会
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根据柔嫩艾美耳球虫顶体膜抗原1(EtAMAl)基因的ESTs序列,利用RACE技术扩增获得其全长序列(2349bp,Genbank登录号:JN032081).该序列含有一个1608bp的开发性阅读框,编码535个氨基酸,理论分子量58kDa.选取9种顶复器原虫的AMA1基因序列进行进化树分析,结果发现该基因与巨型艾美耳球虫、弓形虫和新孢子虫的亲缘关系较近.利用荧光定量PCR对AMA1基因在柔嫩艾美耳球虫不同发育阶段(未孢子化卵囊、孢子化卵囊、子孢子和第二代裂殖子)的表达情况进行分析,发现该基因在子孢子发育阶段高表达.将AMA1基因的胞外序列进原核表达,纯化获得重组融合蛋白rEtAMA1.Western-blot分析表明rEtAMA1具有良好的抗原性.用纯化的rEtAMA1制备特异性多抗血清.该血清可显著抑制柔嫩艾美耳球虫子孢子入侵鸡胚成纤维传代细胞系(DF-1)细胞.利用免疫荧光技术对柔嫩艾美耳球虫子孢子在DF-1细胞(体外)和盲肠(体内)发育过程中EtAMA1的动态分布进行研究,发现EtAMA1在入侵细胞、裂殖子释放及合子的形成中具有重要作用。
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