【摘 要】
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目的：在体外构建并筛选出I型胶原(COLⅠ)的有效RNA 干扰慢病毒载体,用于糖尿病肾病大鼠整体RNAi 实验,观察其对肾组织中目的基因表达的干扰效果.方法：设计3 条siRNA 序列并合成双链DNAoligo,制备目的基因RNA 干扰慢病毒载体,体外感染目的细胞,利用RT- PCR 的方法检测目的基因COLⅠ的表达情况,通过肾动脉注射方法将COLⅠsiRNA慢病毒载体导入糖尿病肾病大鼠肾脏,观察
【出 处】
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中国工程院医药卫生学部肾脏病前沿论坛、第十三届华北地区暨北京市肾脏病学术年会
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目的：在体外构建并筛选出I型胶原(COLⅠ)的有效RNA 干扰慢病毒载体,用于糖尿病肾病大鼠整体RNAi 实验,观察其对肾组织中目的基因表达的干扰效果.方法：设计3 条siRNA 序列并合成双链DNAoligo,制备目的基因RNA 干扰慢病毒载体,体外感染目的细胞,利用RT- PCR 的方法检测目的基因COLⅠ的表达情况,通过肾动脉注射方法将COLⅠsiRNA慢病毒载体导入糖尿病肾病大鼠肾脏,观察大鼠肾脏中靶基因表达的变化情况.结果：酶切鉴定及测序结果均提示siRNA 序列成功连接入载体中.RT- PCR 结果提示1 号靶点的干扰效率最高,达到了77％左右,大鼠活体RNAi 结果显示,肾脏中目的基因的表达也明显减少.结论：COLⅠ靶向RNA 干扰慢病毒载体构建成功,能有效抑制目的细胞中COLⅠ的表达.构建的慢病毒载体在大鼠活体内也具有良好的干扰效果.可能成为防止糖尿病肾病进程的新的治疗方法.
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