【摘 要】
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桑蟥是桑园里的主要害虫之一,属于鳞翅目蚕蛾科桑蟥属.本文根据鳞翅目昆虫已鉴定的孵化酶基因保守序列合成兼并性引物,并从桑蟥转青卵中克隆出部分孵化酶基因.通过RACE-PCR和
【机 构】
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江苏科技大学,江苏镇江212018江苏科技大学,江苏镇江212018;中国农业科学院蚕业研究所、农业部蚕桑遗传改良重点开放实验室,江苏镇江212018
【出 处】
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江苏省生物化学与分子生物学第九届会员代表大会暨第十次学术会议
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桑蟥是桑园里的主要害虫之一,属于鳞翅目蚕蛾科桑蟥属.本文根据鳞翅目昆虫已鉴定的孵化酶基因保守序列合成兼并性引物,并从桑蟥转青卵中克隆出部分孵化酶基因.通过RACE-PCR和SMART cDNA合成技术,获得了桑蟥孵化酶基因(RmHE)全长序列.RmHE长1355bp,其中包含906bp的开放阅读框,编码301个氨基酸,其中有23个氨基酸残基为信号肽序列,208个氨基酸为成熟蛋白酶.同源性分析显示RmHE与BmandHE,BmHEL,ApHEL,BmHELII,CuefHCE,DmHEHS,XHE,MLCE,MHCE23,EHE12,ZHCE1,TuHE,QHE和Astacin蛋白酶功能区序列的相似性分别是83.8％, 82.4％, 80.4％, 74.0％, 44.6％, 42.0％, 33.5％, 32.8％, 32.6％, 32.3％, 32.3％, 32.1％, 31.6％ and30.1％.孵化酶相似的两个特征序列HEWMHILGFLHMQSTYNR和YDYVSCLHY存在于RmHE中,另外还发现了在虾红素蛋白酶家族中保守的四个半胱氨酸残基.根据进化树分析显示桑蟥与野蚕的亲缘关系最近.在卵孵育期不同发育阶段中,RmHE转录本在早期可被检测到并维持较低水平,从孵育的第8天开始剧增并在第9天达到最高值.RmHE转录本随胚胎发育过程和孵化而变化,表明其在孵化过程中起重要作用.另外,RmHE转录本可在幼虫的中肠中检测到,推测RmHE可能还有食物消化等其它生物学功能.将RmHE去信号肽对应核苷酸序列、成熟酶功能区对应核苷酸序列分别克隆入原核表达载体pET28a,在大肠杆菌BL21中获得高效表达.本文是首次对害虫卵孵化分子机理进行探索研究,预期结果将为以孵化酶为靶点的新型杀虫剂研发提供基础信息.
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