【摘 要】
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目的：本试验旨在构建表达猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)N蛋白的真核重组质粒,探讨TGEV N蛋白在TGEV诱导的细胞周期阻滞和凋亡中的作用. 方法：提取PK-15细胞的总RNA,扩增得到TGEV
【机 构】
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西北农林科技大学 动物医学院,陕西杨凌 712100
【出 处】
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中国畜牧兽医学会兽医病理学分会第二十次学术研讨会暨中国病理生理学会动物病理生理专业委员会第十九次学术研讨会
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目的：本试验旨在构建表达猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)N蛋白的真核重组质粒,探讨TGEV N蛋白在TGEV诱导的细胞周期阻滞和凋亡中的作用.
方法：提取PK-15细胞的总RNA,扩增得到TGEV N基因,并将N 基因克隆至真核表达载体pEGFP-N1,双酶切及测序鉴定正确后,将构建的N基因真核表达载体转染至PK-15细胞,通过流式细胞术、western blot等方法检测TGEV N蛋白在TGEV诱导的细胞周期和细胞凋亡中的作用.
结果：TGEV N蛋白可将细胞周期阻滞在S期和G2/M期，诱导细胞发生凋亡;TGEV N蛋白可下调cyclin B1,cdc2和cdk2的表达，上调p53和p21，导致促凋亡分子Bax从细胞浆转位到了线粒体、线粒体中蛋白Cyt c释放到细胞浆，活化Caspase-3。
结论：本研究成功构建了表达猪TGEV N蛋白的真核重组表达质粒，该蛋白通过调控cyclin A-cdk2和cyclin B1-cdc2使细胞周期阻滞在S期和G2/M期，并通过诱导促凋亡分子Bax和线粒体蛋白Cytc的转位，进而激活Caspase-3引起细胞凋亡。
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