【摘 要】
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目的 掌握实验兔急性肾小管坏死模型的建立与自体骨髓间充质干细胞的获取、制备和培养方法.采用经肾动脉靶向灌注移植兔自体骨髓间充质干细胞,与未治疗对照组比较,观察移植后的骨髓间充质干细胞对缺血再灌注损伤引起的急性肾小管坏死的修复作用及其对肾功能恢复的影响. 方法 实验兔自体骨髓间充质干细胞的获取与培养：8只健康日本大耳白兔,体质量2±0.5Kg,随机分成两组(BM-MSCs移植组和对照组),每组各4只
【出 处】
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中华放射学学术大会2016、中华医学会第23次全国放射学学术大会暨中华医学会第24次全国影像技术学术大会
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目的 掌握实验兔急性肾小管坏死模型的建立与自体骨髓间充质干细胞的获取、制备和培养方法.采用经肾动脉靶向灌注移植兔自体骨髓间充质干细胞,与未治疗对照组比较,观察移植后的骨髓间充质干细胞对缺血再灌注损伤引起的急性肾小管坏死的修复作用及其对肾功能恢复的影响. 方法 实验兔自体骨髓间充质干细胞的获取与培养：8只健康日本大耳白兔,体质量2±0.5Kg,随机分成两组(BM-MSCs移植组和对照组),每组各4只；模型建立前所有实验兔均采血行血肌酐、尿素氮检测并记录.在模型建立后24h移植组与对照组各随机选1只兔处死,切除肾脏行病理学观察.移植组其余3只兔在无菌条件下采集骨髓各5ml,以贴壁培养法分离自体BM-MSCs并进行原代及传代培养,培养过程中进行细胞形态学观察.随机选取其中一瓶P2代细胞做(4,6-联脒-2-苯基吲哚4,6-diamidino-2-phenylindole,DAPI)标记并在显微镜下观察. 结果 BM-MSCs的扩增培养：3只移植组获取骨髓,细胞接种24h后可见少量细胞贴壁；3～4d后可见细胞集落形成.5～7d可见细胞铺满瓶底,达到融合状态,可进行传代培养.第3代以后, 细胞分裂活跃,细胞形态呈成纤维状改变,大部分呈长梭状.实验兔肾缺血再灌注损伤模型建立后,病理学观察显示肾小管上皮细胞均有不同程度变性、坏死.动脉移植BM-MSCs后7d,荧光显微镜下可观察到经DAPI标记的BM-MSCs沉积于肾组织. 结论 实验兔采用夹闭双肾动脉90min后恢复血流再灌注,能快速成功的建立急性缺血性再灌注损伤后急性肾小管坏死模型.经动脉内插管灌注的BM-MSCs可向损伤肾组织归巢,且在移植7天后DAPI仍保持荧光特性.
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