运用T7噬菌体展示技术和RNA亲和捕捉系统筛选HCV负链3’UTR RNA相互作用蛋白

来源 :第七次全国医学分子微生物学及生物技术研讨会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:yeshi804883653
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目的:运用RNA亲和捕捉系统从人肝细胞cDNA噬菌体文库中筛选与丙型肝炎病毒负链3UTR RNA相互作用的宿主蛋白。 方法:通过体外转录方法获得HCV(1b型)负链3UTRRNA,与生物素化的寡聚核苷酸杂交后偶联于链酶亲和素磁珠上,与人肝细胞cDNA噬菌体文库通过亲和捕捉、扩增的过程反复筛选与HCV负链YUTR RNA特异性结合的重组噬菌体,对筛选后得到的噬菌体进行序列测定和BL,AST基因同源性分析。 结果:经过七轮筛选后,噬菌体文库高度富集,阳性克隆经过序列测定和基因同源性分析后,得到两种可与HCV负链3UTRRNA相互作用的蛋白。 结论:利用RNA亲和捕捉系统,以与链酶亲和素磁珠偶联的RNA为固相基质,从17噬菌体展示cDNA文库中筛选相互作用蛋白是一种快速、高效、特异性好的靶蛋白筛选方法。本研究为揭示宿主蛋白与HCVRNA的相互作用,进一步阐明HCV复制机制提供了实验依据。
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