【摘 要】
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目的 HoxB4是造血细胞分化早期的重要调控因子,其是最有潜力的造血干细胞扩增工具之一,遂本研究通过建立可示踪的造血干细胞自我更新的斑马鱼模型,在斑马鱼体内时-空特异性过表达斑马鱼HoxB4基因,旨在进一步探讨Hoxb4基因在造血干细胞发育和自我更新中的功能.方法 利用Cre-LoxP系统,通过斑马鱼成血成血管共同前体细胞的特异性启动子lmo2驱动HoxB4,结合EGFP荧光标记技术,建立可示踪的
【出 处】
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第十四届中国西部实验动物管理与学术交流会
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目的 HoxB4是造血细胞分化早期的重要调控因子,其是最有潜力的造血干细胞扩增工具之一,遂本研究通过建立可示踪的造血干细胞自我更新的斑马鱼模型,在斑马鱼体内时-空特异性过表达斑马鱼HoxB4基因,旨在进一步探讨Hoxb4基因在造血干细胞发育和自我更新中的功能.方法 利用Cre-LoxP系统,通过斑马鱼成血成血管共同前体细胞的特异性启动子lmo2驱动HoxB4,结合EGFP荧光标记技术,建立可示踪的有组织特异性的异位表达HoxB4的转基因系.通过实时荧光观察、基因组测序、斑马鱼全胚胎原位杂交(Whole mount in situ hybridization,WISH)和western blot的方法,鉴定了组织特异性转基因系；通过WISH对斑马鱼造血发育中重要的转录因子mRNA的水平进行检测,从而进行表型筛选.结果 通过荧光观察筛选获得2个造血组织特异表达HoxB4的转基因系,并通过基因组PCR和测序、斑马鱼全胚胎原位杂交和western blot的方法,鉴定和获得了2个在成血成血管共同前体细胞中稳定表达HoxB4的特异转基因系.通过WISH检测,发现HoxB4过表达的转基因斑马鱼系在造血发育早期24hpf时,scl+原始造血干细胞在后部中间细胞群(ICM)部位出现明显增加,30hpf达到高峰并表达时相明显延长,lmo2+原始造血干细胞表达在同期同样出现增加；RunXl+和c-myb+定向造血干细胞变化不明显；血管内皮细胞标记基因FLK-1表达减少,Pu.1+髓祖细胞出现扩增,而成熟髓系细胞的标记基因mpo和L-plastin表达减少；gata-l+红系祖细胞和成熟红细胞的标记基因a-el globlin没有明显变化,标记淋系的基因rag-1也没有明显差异.结论 成功建立并鉴定时,空特异性过表达HoxB4基因的转基因斑马鱼系；在活体上发现Hoxb4在成血成血管共同前体细胞中异位表达后,可增加和延长斑马鱼原始造血过程中HSC的自我更新能力,同时HSC的分化能力也发生变化.
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