【摘 要】
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根据副猪嗜血杆菌的inf B基因和猪链球菌2型的Cps2j基因各设计1套LAMP引物,在同一体系中进行双重LAMP扩增,采用琼脂糖凝胶电泳和SYBR GreenⅠ荧光检测,并对双重LAMP扩增产物
【机 构】
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韶关学院英东生命科学学院;中国农业科学院哈尔滨兽医研究所-韶关学院动物疫病诊断中心联合实验室;
【基金项目】
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广东省公益研究与能力建设专项资金资助项目(2014A020208140);粤北生猪生产及疫病防控协同创新发展中心资助项目(粤教科函[2014]26号-16);2016年度广东省大学生创新创业训练计划资助项目(201610576028)
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根据副猪嗜血杆菌的inf B基因和猪链球菌2型的Cps2j基因各设计1套LAMP引物,在同一体系中进行双重LAMP扩增,采用琼脂糖凝胶电泳和SYBR GreenⅠ荧光检测,并对双重LAMP扩增产物进行熔解曲线的分析,建立了副猪嗜血杆菌与猪链球菌2型双重LAMP检测方法并进行了特异性和灵敏度试验。结果显示,该方法的灵敏度比常规PCR的高两个数量级。通过熔解曲线特征峰的分析可以判断感染的确切目标菌株,且与其他的病原菌无交叉反应。对29份临床样品检测的结果显示,普通PCR和双重LAMP的检出率分别为17.0%和31.0%。结果表明,该方法具有良好的灵敏度和特异性,可实现两种病原的同步快速检测,对于临床疫病的初筛有一定的帮助。
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