盐藻小G蛋白基因的克隆及表达分析

来源 :2013年中国水产学会学术年会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:huangom444
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  克隆盐藻小G蛋白基因(命名为DsRab),为研究盐藻耐盐分子机制奠定基础.采用RT-PCR和RACE技术克隆了盐藻小G蛋白基因DsRab cDNA全长序列(GenBank Accession No.JN989548),对其进行了生物信息学分析,并通过QRT-PCR方法检测盐胁迫下该基因的表达情况.结果表明,DsRab基因的cDNA全长为1 299 bp,开放阅读框(ORF)为612 bp,编码203个氨基酸,5非编码区78 bp,3 非编码区609 bp;保守性结构域分析可知编码的小G蛋白有4个GTP/GDP保守结构域,一个效应区、一个羧基端的半胱氨酸结构域和五个Rab亚家族共有的结构域;二级结构预测表明该蛋白有32.02%的α-螺旋,23.65%的伸展片段,44.33%的自由卷曲,三维建模成功;比对分析发现DsRab蛋白与多种生物的Ypt/Rab的氨基酸序列具有较高的同源性.荧光定量PCR结果表明,盐藻在高盐(3.0 mol/L)胁迫下,DsRab因表达量显著上调,1h后表达量达到最大值,为正常培养下对照组(0 h)的4.9倍,差异极显著(P<0.01).这些研究结果为进一步阐明盐藻小G蛋白DsRab的功能及作用机制奠定了基础.
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