【摘 要】
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目的:研究粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)在巴斯德毕赤酵母(Pichiapastoris)中的分泌表达.方法:采用PCR技术以GM-CSF基因为模板定向克隆到PGAPZα-A表达载体中;转化到Pp
【机 构】
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海南国栋药物研究所,海口,571101
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目的:研究粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)在巴斯德毕赤酵母(Pichiapastoris)中的分泌表达.方法:采用PCR技术以GM-CSF基因为模板定向克隆到PGAPZα-A表达载体中;转化到PpastorisGS115(his4)酵母菌进行表达,表达后的产物用SDS-PAGE蛋白质电泳鉴定,MTT比色法测活.结果:GM-CSF基因克降到表达质粒载体PGAPZα-A并成功地实现了在毕赤酵母中的表达,该目标蛋白不需复性,其活性可达到1.27×108IU/mg.结论:rhGM-CSF基因在酵母中成功地克隆表达,表达后的产物有明显活性而且蛋白含量高,杂蛋白少,对规模化生产十分有利.
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