孔石莼作为经济海藻,资源丰富,营养价值与药用价值高。孔石莼脂质中含有多种多不饱和脂肪酸,这些脂肪酸具有良好的生物活性,如十六碳四烯酸(n-3)与十八碳四烯酸(n-3)。用无水乙醇对孔石莼干粉中的脂质进行提取,经过皂化与酸化后,按照脂肪酸尿素比为1:1(w/w),用尿素包合法对孔石莼中的不饱和脂肪酸进行初步纯化。用分子蒸馏法对尿素包合后的脂肪酸进一步纯化,分子蒸馏条件为真空度6.6 pa,蒸馏温度80℃,进料速度2 mlL/min。尿素包合后,孔石莼脂肪酸中不饱和脂肪酸由70.69%上升到96.41%,经过尿素包合之后的脂肪酸进行进一步的分子蒸馏,十六碳四烯酸(n-3)含量达到56.73%。本研究探究孔石莼多不饱和脂肪酸的纯化工艺,为十六碳四烯酸的制备和孔石莼的利用提供参考。