scTRAIL融合表达及生物学作用研究

来源 :第17届全国干扰素及细胞因子学术会议 | 被引量 : 0次 | 上传用户:longsir8481
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  1995年发现的肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL),是肿瘤坏死因子超家族成员之一,属于Ⅱ型跨膜蛋白。本研究中,尝试将人TRAIL114-281三聚体的三个单体的氨基酸片段以两段柔性氨基酸短臂(GGGS)3,头尾相连,使之融合成为一条多肽链scTRAIL,即:TRAIL114-281-(GGGS)3-TRAIL114-281-(GGGS)3-TRAIL114-281,以增强抗肿瘤的效果。通过PCR和限制性内切酶酶切、连接技术,获得编码单链化蛋白scTRAIL的基因序列,构建了含编码人scTRAIL基因的重组质粒,在宿主菌E.coli BL2I中得到了较高水平的表达,并用麦芽糖结合蛋白亲和层析柱对表达产物进行了初步纯化,获得了融合了麦芽糖结合蛋白标签的可溶性重组蛋MBP-scTRAIL。用ICR小鼠作为实验动物,腹腔注射MBP-scTRAIL溶液,连续观察14天,检测其急性毒性。结果表明,MBP-scTRAIL的抗肿瘤活性明显高于MBP-TRAIL114-281;在动物急毒实验中,MBP-scTRAIL未对实验动物表现毒性,对正常机体组织无损伤。预示着该蛋白在肿瘤临床治疗上具有良好的应用前景。
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