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目的 阿片类物质作为一种强效的镇痛药物在临床上广泛使用,但是阿片类物质的具有的成瘾性。小胶质细胞作为中枢神经系统固有免疫的主要成分,在阿片类物质作用下可以发生凋亡,致中枢神经系统损伤,但具体机制目前尚不十分清楚。本研究拟探讨Toll样受体9(TLR9)在吗啡致小胶质细胞凋亡中的作用及其机制,为阿片类物质的临床应用及副作用的防治提供新的思路和方法。方法 利用原代小胶质细胞体外培养技术,分别培养野生型(WT),TLR9基因敲除型(TLR9 KO)和μ阿片受体基因敲除型(μOR KO)小胶质细胞；RT-PCR和Western blot检测吗啡作用于WT小胶质细胞后TLR9在mRNA和蛋白水平表达变化及其量效关系；采用TUNEL和流式细胞计量术检测吗啡作用于WT、TLR9 KO、μOR KO小胶质细胞后细胞凋亡情况；Western blot检测磷酸化的p38 MAPK,MKK3/6以及Bcl-2,Bax在蛋白水平的改变。并进一步使用TLR9抑制剂CpG ODN2088和p38抑制剂SB203580预处理细胞,观察其对吗啡诱导小胶质细胞凋亡的影响及相关蛋白的变化。结果 吗啡诱导小胶质细胞TLR9表达增加,呈时间和剂量依赖性；TLR9缺失和可以抑制吗啡诱导的小胶质细胞凋亡,TLR9抑制剂也可以抑制吗啡诱导小胶质细胞凋亡,p38抑制剂可以减弱吗啡的促凋亡作用。吗啡可以诱导Bcl-2表达下降,Bax表达升高,但TLR9缺失抑制了Bcl-2、Bax的表达变化,阻断p38 MAPK也可以明显减弱Bcl-2和Bax的表达变化。吗啡可以诱导WT小胶质细胞p38和MKK3/6磷酸化增加,但TLR9和μOR缺失均可以抑制吗啡诱导的p38、MKK3/6磷酸化水平变化。结论 吗啡通过μOR和TLR9信号通路诱导小胶质细胞凋亡,并且p38 MAPK、MKK3/6、Bcl-2、Bax参与了该信号通路,TLR9缺失可阻断吗啡诱导的小胶质细胞凋亡。所以抑制TLR9和/或阻断μOR都可以防治阿片类物质引起的中枢神经系统损伤。