论文部分内容阅读
目的:分离培养SD大鼠脂肪来源间充质干细胞,研究间充质干细胞在蚕丝蛋白支架上生长及分泌情况,初步构建用于盆底功能重建的组织工程补片。方法:取SD大鼠双侧腹股沟脂肪组织,采用酶消化法分离间充质干细胞,接种后以DMEM/ F12培养基培养。待细胞呈亚融合状态后,胰酶消化传代。稳定传代的细胞分别以免疫细胞化学法及流式细胞分析对其表面标志物进行鉴定。蚕丝编织后脱胶并制成复合支架,将脂肪间充质干细胞种植于支架上。待细胞在支架上充分粘附并生长后,扫描电镜观察支架上细胞的生长及细胞外基质分泌情况。结果:脂肪来源间充质干细胞体外分培养48~72h后形成集落,呈成纤维细胞样贴壁生长,7~lOd完全融合,并稳定传代。免疫细胞化学法及流式细胞分析均证实其表面标记物CD29, CD44及CD90阳性,CD45阴性,与骨髓间充质干细胞相似。扫描电镜显示蚕丝蛋白复合支架的编织部分呈网状编织结构,纤维表面光滑;蚕丝海绵部分为均一的多孔样结构。脂肪间充质干细胞在支架上粘附牢固,细胞分裂及增殖良好,并可见细胞外基质分泌。结论:间充质干细胞可于脂肪组织中成功分离培养,并可在体外稳定传代,符合组织工程对种子细胞的要求。蚕丝蛋白支架具有良好的生物相容性,可与脂肪来源间充质干细胞构成具有应用前景的盆底重建组织工程补片。