【摘 要】
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分别用3.5L转瓶和7L生物反应器微载体系统培养HEK-293细胞,接种流感重组腺病毒,比较两种培养方式生产病毒的毒价。材料与方法 :向转瓶中接种3.4×107个HEK-293细胞,每2d传代
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分别用3.5L转瓶和7L生物反应器微载体系统培养HEK-293细胞,接种流感重组腺病毒,比较两种培养方式生产病毒的毒价。材料与方法 :向转瓶中接种3.4×107个HEK-293细胞,每2d传代细胞并计数,8d后细胞数目达到2.8×108个,接种流感重组腺病毒,2d后收取病毒并测定毒价。使用Cytodex-1型微载体培养HEK-293细胞,每12h取样并计数,3d后细胞数目达到8.16×108个,接种病毒,2d后收取病毒病并测定毒价。结果与讨论:转瓶培养3d细胞数目增加1.35倍,反应器培养3d细胞数目增加8.16倍,是转瓶的2.16倍,生物反应器培养HEK-293细胞增长速率高于转瓶培养。转瓶生产收获病毒200ml,滴度为9.28PFU/ml,反应器生产收获病毒1.2L。滴度为10.7PFU/ml,经反应器培养流感重组腺病毒增殖数量是转瓶培养的6.92倍。生物反应器微载体系统培养的流感重组腺病毒数量和滴度明显高于转瓶,初步证明了病毒的规模化的可行性,为大规模的疫苗生产提供了参考。在微载体培养系统中,细胞贴壁面积增加,培养条件可操纵性强,因此细胞生长速率及病毒滴度较转瓶培养明显增加,降低了培养成本缩短了培养周期。
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