【摘 要】
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目的探索肝纤维化关键基因COL1A1、TGFB的转录水平调控机理,为进一步的机理研究打下基础。方法提取肝星状细胞基因组DNA,设计引物进行PCR将COL1A1与TGFB启动子序列调取出来,
【机 构】
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中国医学科学院北京协和医学院医药生物技术研究所;
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目的探索肝纤维化关键基因COL1A1、TGFB的转录水平调控机理,为进一步的机理研究打下基础。方法提取肝星状细胞基因组DNA,设计引物进行PCR将COL1A1与TGFB启动子序列调取出来,通过DNA重组技术将目的片断定向克隆至Luciferase报告载体pGL4.17中,经酶切、序列测定鉴定重组质粒。经细胞转染,采用双荧光素酶报告基因测试技术,检测TGF-β1对COL1A1P与TGFBP的活性影响。结果成功构建质粒pGL4.17-COL1A1P和pGL4.17-TGFBP;TGF-1使萤火虫荧光素酶的荧光明显增强。结论构建了用于研究COL1A1和TGFB基因的启动子调控机理的双荧光素酶报告系统,可以用于进一步的机理研究。
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