【摘 要】
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根据已得到的Hsfem-1b和Hsfem-1c基因的全长cDNA序列,经NCIBI中比对获知这两个序列都有3个以上的结构域,在这两个基因结构域中各选取一段包含一个完整且具有代表性结构域
【机 构】
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南昌大学生命科学与食品工程学院,南昌330031
【出 处】
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第八届南方六省(粤、湘、鄂、赣、桂、琼)动物学学术研讨会
论文部分内容阅读
根据已得到的Hsfem-1b和Hsfem-1c基因的全长cDNA序列,经NCIBI中比对获知这两个序列都有3个以上的结构域,在这两个基因结构域中各选取一段包含一个完整且具有代表性结构域的序列,并对此设计扩增该完整结构域的表达引物,构建pET-32aFem1重组表达载体,将经测序正确的重组表达质粒转进大肠奸菌BL21(DE3)中,IPTG诱导蛋白表达,分别得到了分子量约为38kDa、34kDa的融合蛋白。使用Ni-NTA树脂亲和层析法纯化表达产物,SDS-PAGE检测显示获得了纯净的融合蛋白,Bradford法进行蛋白定量。将纯化的HsFem-1c融合蛋白作为抗原免疫日本长耳兔,制备多克隆抗体,ELISA间接法检测抗血清效价1：5200000；经Westernblotting获得的图片得知制备的多克隆抗血清能够特异性识别纯化的HsFem-1c融合蛋白；最后做冰冻切片,用制备的兔抗血清进行免疫荧光定位发现fem-1c基因在细胞内表达。
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