甲基化是表观遗传学的重要研究领域之一。在DNA中,甲基化主要表现形式为5-甲基胞嘧啶(m5C),并分布于CpG位点上。大量研究表明,DNA中m5C修饰在基因表达调控、基因印记、转座子沉默、X染色体失活以及癌症发生等重要生物学过程起到关键的作用。近年来,研究发现RNA m5C也是一种重要的表观遗传学修饰。有多种实验室方法,包括Bisulfite-sequencing、MeRIP、Aza-IP和miCLIP在转录组水平对这一甲基化修饰进行了定位分析,发现m5C在mRNA和ncRNA中一种普遍的修饰。然而,当前的研究方法主要局限在RNA m5C修饰的定性分析,即只定位不定量,这在研究RNA m5C修饰的功能时会有一定的局限性。Bisulfite-pyrosequencing是当前在DNA中应用较为成熟的m5C精确定位定量分析技术,我们将这一方法进行了改进,使之适用于RNA m5C修饰的检测。在两种人细胞HepG2和293T中,我们对一种功能性lncRNAH19进行了m5C修饰分析。结果发现C1709位点在两种细胞中表现出差异性修饰,在HepG2中基本没有甲基化,而在293T中有72%表现为甲基化,暗示不同环境下lncRNA H19 m5C修饰水平的差异可能使其具有不同的功能。另外,结果证实DNA中用于m5C修饰位点的分析方法也适用于RNA中m5C修饰的分析,为进一步研究RNAm5C的功能提供了技术参考。