【摘 要】
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棉铃虫是许多农作物的一种主要害虫,其对有机磷、拟除虫菊酯类杀虫剂已产生较严重的抗药性.其体内的羧酸酯酶是导致上述抗药性产生的重要代谢酶系之一.为了在原核表达系
【机 构】
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西北农林科技大学无公害农药研究与服务中心,陕西杨凌 712100
【出 处】
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第十五届全国农药学科科学教学科研研讨会
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棉铃虫是许多农作物的一种主要害虫,其对有机磷、拟除虫菊酯类杀虫剂已产生较严重的抗药性.其体内的羧酸酯酶是导致上述抗药性产生的重要代谢酶系之一.为了在原核表达系统成功表达和制备出有活性的棉铃虫羧酸酯酶表达产物,研究其代谢活性,本研究利用大肠杆菌表达棉铃虫羧酸酯酶基因001C 及突变基因001CA127D,表达产物经分离纯化后,对所得纯化蛋白进行检测,SDS-PAGE 和Western blot 检测结果表明获得高纯度的酯酶表达产物.活性测定结果显示CarE001C 对模式底物α-乙酸萘酯具有一定酶活,速率常数(kcat)为0.27s-1,和底物的亲和系数(Km)为117.43μmol-1；高效液相色谱法(HPLC)检测结果表明得CarE001C 和突变体001CA127D 对2 种菊酯类杀虫剂(β-氯氰菊酯和氰戊菊酯)具有较低代谢活性(0.067～0.1645μM·min-1·μM-1),但对毒死蜱具有较高代谢活性(1.183μM·min-1·μM-1 and 1.342μM·min-1·μM-1).上述结果说明,羧酸酯酶CarE001C 在大肠杆菌原核系统获得成功表达,且羧酸酯酶CarE001C 在棉铃虫体内对菊酯类和有机磷类杀虫剂具有一定代谢活性.这将有助于今后利用原核表达系统制备具有活性的棉铃虫羧酸酯酶离体表达产物,以及系统和深入研究羧酸酯酶的三维结构.
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