【摘 要】
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本试验根据延长酶保守区序列设计上下游引物,采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术及cDNA末端快速扩增(RACE)技术首次克隆得到中华绒螯蟹脂肪酸延长酶(elongase of very long chain fatty acid,ELOVL)基因全长(GenBank accession number： KR005628).分析ELOVL基因序列表明,该基因cDNA全长2 089bp,其中5
【机 构】
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上海海洋大学农业部淡水水产种质资源重点实验室,上海201306
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本试验根据延长酶保守区序列设计上下游引物,采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术及cDNA末端快速扩增(RACE)技术首次克隆得到中华绒螯蟹脂肪酸延长酶(elongase of very long chain fatty acid,ELOVL)基因全长(GenBank accession number： KR005628).分析ELOVL基因序列表明,该基因cDNA全长2 089bp,其中5非编码区长350bp,3非编码区长674bp,开放阅读框(open reading frame,ORF)长1065bp(包含终止密码子),编码354个氨基酸；并且编码的氨基酸具有典型的延长酶特征：1个高度保守的氧化还原中心组氨酸簇HVIHH,多个保守区和多个跨膜区(KFTEFLDT、NTFVHIVMYVYY、TNFQM).经氨基酸同源性和系统发育树分析表明,中华绒螯蟹预测的ELOVL氨基酸序列与顶切叶蚁(acromyrmex echinatior)的氨基酸序列相似性最高,为59％；同时与家蝇(musca domestica)聚为一支,与日本囊对虾(marsupenaeus japonicus)等聚为一体.通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术研究ELOVL mRNA在中华绒螯蟹眼柄、肠、心脏、肝胰腺、脑神经节、胸神经节、肌肉、胃、鳃共九个组织中及在不同配合饲料饲喂下肌肉、肝胰腺、卵巢及精巢四个可食部位组织中的表达情况.结果显示,ELOVL在各组织中均有表达,在肝胰腺和肠道中表达最高,其次是胃、鳃、脑神经节、肌肉、胸神经节、眼柄,在心脏中表达水平最低.分析饲喂不同脂肪源的配合饲料的结果表明,饲喂98天后,ELOVL在卵巢中表达最高,显著高于其他三个组织(P＜0.05)；卵巢和肝胰腺组织中ELOVL mRNA的表达水平随着饲料中鱼油(富含n-3多不饱和脂肪酸)比例减少、豆油(缺少n-3多不饱和脂肪酸)比例增加而升高,全豆油(SO)饲喂组中的表达量显著高于全鱼油(FO)饲喂组的表达量(P＜0.05)；但是在肌肉和精巢组织中差异不显著(P＞0.05).ELOVL的克隆和表达分析为探究中华绒螯蟹自身合成高度不饱和脂肪酸(highly unsaturated fatty acid,HUFA)途径及调节机制奠定了基础.
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