大豆FtsH基因的多克隆抗体的制备及胁迫条件下的表达分析

来源 :第23届全国大豆科研生产研讨会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:lcc00060
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  金属蛋白酶FtsH属于AAA蛋白酶家族,它是由FtsH基因编码的一种ATP和Zn2+依赖型兼职蛋白,兼具ATP酶活性、蛋白水解活性和分子伴侣活性,在热激、高渗、光胁迫、冷诱导、病害等逆境胁迫反应中发挥重要作用,该基因在生物基因组中广泛分布。目前,通过生物信息学方法推测在大豆基因组中存在11个FtsH基因,这些大豆的FtsH基因与7种拟南芥的AtFtsH基因相一致,但在大豆方面还没有FtsH基因功能及逆境胁迫有关的研究报道。本研究利用大豆FtsH蛋白的特异性抗体,探明大豆中的FtsH基因在盐、热、低温和干旱等非生物胁迫下的表达特征,分析其表达模式与抗逆性的关联性。采用综合抗逆性较好的大豆品种抗线3号为试验材料,利用盐,热,冷和干旱等非生物胁迫处理的植株叶片与对照叶片同时取样,以同源性克隆方法获得大豆FtsH基因,其与其他植物来源的基因高度同源。根据已知的拟南芥AtFtsH蛋白质信息,利用FtsH保守结构域信息,用计算机软件预测抗原决定簇,细菌体系体外表达、纯化FtsH蛋白质片段,免疫新西兰大白兔,制备针对大豆FtsH蛋白质的抗体。以盐、热、低温和干旱胁迫前后的大豆幼苗叶片为材料,提取蛋白用Western blotting检测FtsH蛋白质的表达。免疫印迹检测表明,大豆叶片中的FtsH基因在非生物逆境胁迫条件下表达上调。证实FtsH作为一诱导型应激蛋白参与环境胁迫反应。
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