碱性果胶酶高产菌株的构建和在苎麻脱胶中的应用

来源 :第七届中国工业生物技术发展高峰论坛 | 被引量 : 0次 | 上传用户:caoenjia
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  生物脱胶主要包括酶法脱胶和微生物脱胶两种方法.酶法脱胶是直接利用脱胶酶制剂作用于苎麻上,利用酶的生物活性,降解苎麻纤维外包裹的胶质复合体,从而使纤维分离出来.脱胶酶以果胶酶为主、辅以木聚糖酶和木质素降解酶.酶法脱胶所需的时间较短,不需要微生物生长所耗费的培养时间,设备简单,是今后脱胶的主流发展方向.本研究按照毕赤酵母的密码子偏爱性,将枯草芽孢杆菌的碱性果胶酶基因进行了全合成,优化后的基因在毕赤酵母进行了表达,表达产物相比优化前,发酵上清酶活性提高了50%.通过理性设计,将132位的氨基酸V突变成F,获得了稳定性和比酶活提高的突变体.最后通过活性筛选,获得了一个摇瓶酶活达到250 U/ml(A235法)的高产菌株,通过REAL-TIME PCR进行测定,该高产菌株含有12个拷贝的果胶酶基因.将该果胶酶基因工程菌上发酵罐发酵,发酵酶活达到2000 U/ml以上,最适作用温度50℃,最适作用pH为9.4.利用该酶在50℃处理苎麻精干麻1小时,可使残胶率低于3%,扫描电镜观察酶法脱胶的纤维表面相比对照更加光滑,无皱褶.
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