层出镰孢菌转化子的获得及侵染分析

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玉米鞘腐病是近年来我国主要玉米产区频繁出现的一种新型病害,并且呈现逐年加重的趋势。该病害主要是由层出镰孢(Fusarium proliferatum)引起的,严重时可导致玉米倒伏,产量下降。本实验通过农杆菌介导遗传转化技术,将带有绿色荧光蛋白GFP基因和抗性基因HPH的质粒pBHt1导入农杆菌感受态AGL-1中,再将转化成功的农杆菌与层出镰孢野生型共同培养,经过HPH抗性筛选得到疑似转化子。然后进行荧光显微观察和T-DNA插入转化子的分子检测,确定得到100多株转化子并对其进行表型分析和产孢量测定。在玉米开花期,分别用层出镰孢野生型和转化子孢悬液接种玉米叶鞘,10d以后用植物病斑扫描仪测量叶鞘病斑面积,确定转化子致病性强弱。以上实验结果如下。(1)根据转化子的形态将其分为三类:第一类,生长速率与野生型相近,其气生菌丝和营养菌丝较发达,菌落质地较疏松,呈绒毛状,边缘呈放射状,菌落正面呈白色、浅粉色、浅紫色等,反面呈粉紫色和黄色。第二类,生长速率比野生型变慢,气生菌丝和营养菌丝较短,菌落质地较稀松,成棉絮状,边缘不规则,菌落正反面都呈白色。第三类,生长速率与野生型相比明显缓慢,气生菌丝和营养菌丝既短又细,菌落质地黏稠,成地毯状,边缘较整齐,菌落正反面都呈白色。(2)部分转化子的产孢量和致病性发生了明显变化,FP62和FP80的产孢量和致病性较野生型显著降低,FP1 06的致病性较野生型显著升高。
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