氯丝菌素是S.antibioticus DSM 40725产生的一类螺环乙酰乙酸内酯类抗生素,有着抗感染、抗肿瘤和抑制胆固醇合成等生物活性.本课题主要研究氯丝菌素簇内调控基因chlF1(TetR家族)和chlF2(SARP家族)的调控机制,为理性改造菌株和提高抗生素产量提供重要理论依据.通过基因敲除、回补、高表达等实验来研究chlFl,chlF2的功能。分别构建了敲除质粒，获得了突变株△ch1F1和△chIF2，并以卡那霉素抗性基因为探针，通过Southern blot实验分别获得了5株△ch1F1和8株△ch1F2。以枯草芽抱杆菌为指示菌对发酵液进行生物活性检测，突变株在氯丝菌素出峰时间的收集液无抑菌活性，更加肯定了敲除结果。当敲除chIF2后，在6.5min处吸收峰较野生型明显升高且有生物活性，可能是因为阻断了SARP家族蛋白Ch1F2后积累了某种仍具有活性的途径中间体.此外，为确定调控蛋白Ch1F1作用的靶基因，已成功构建载体并异源表达Ch1F1,对其进行了蛋白纯化，在生物合成基因簇内分析并设计了10对探针进行EMSA实验。实验结果表明Ch1F1能够与chlG和chlFl的启动子区结合，并且前者结合能力强于后者。说明chlG(编码ABC transporter)和chlFl(TetR调控蛋白)是Ch1F1的靶基因，结果初步表明Ch1F1可能通过调控上述基因的表达来有效控制氯丝菌素的生物合成。