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目的:通过对口腔癌、口腔白斑及正常人群口腔黏膜脱落细胞DNA定量分析,观察该方法对口腔癌早期诊断的可行性,同时建立口腔白斑恶变风险评估的定量指标.寻找一种无创性、高特异性和高敏感性、操作简单、容易被患者接受的检测方法,为口腔癌的早期诊断及癌前病变恶变风险分析提供依据.
方法:选择就诊于首都医科大学附属北京口腔医院经临床诊断为口腔癌的患者93例,口腔白斑82例,及正常对照组102例,其中口腔癌及口腔白斑需经组织病理学诊断.用特制毛刷刷取口腔黏膜脱落细胞,薄层液基制片,Feulgen染色,全自动细胞图像分析系统提取细胞DNA指数(DI),进行定量分析.同时建立统计学模型,根据DI计算口腔白斑恶变风险度,并对口腔白斑患者进行随访跟踪.
结果:根据DNA定量分析阳性诊断标准:(1)DI≥2.3的细胞为倍体异常细胞,其个数≥5个;(2)异倍体峰;(3)增殖细胞比例≥10％,93例口腔癌患者中有89例DNA定量分析检测结果为阳性,口腔白斑中有4例为阳性,102例正常对照组DNA定量分析结果均为阴性.综上口腔黏膜脱落细胞DNA定量分析在口腔癌诊断的敏感性为95.70％,特异性为97.83％,阳性预测值为95.70％,阴性预测值为97.83％.对该数据分析表明随着病理分级严重程度的升高,炎症细胞(淋巴细胞,粒细胞)、增殖细胞百分比显著增高,且非均质型白斑其增殖细胞与倍体异常细胞的百分比和DI较均质型白斑显著提高.同时总结口腔癌及口腔白斑巴氏染色细胞学特征:(1)口腔癌:癌细胞单个散在,核深染,核浆比明显增大,出现异型性或呈片状排列,圆形或形状不规则,出现异型性,核深染,核浆比增大,有时可见裸核;(2)口腔白斑伴中度异常增生:细胞核增大,大小不一,排列不规则,核浆比稍增大:(3)口腔白斑伴轻度异常增生:细胞核不规则型,部分极性消失,但分布较均匀,核浆比正常:(4)口腔白斑不伴异常增生:其细胞学表现同正常黏膜上皮类似.随后提取口腔白斑病患者口腔黏膜脱落细胞DI,过滤二倍体细胞信号,放大增殖细胞、倍体异常细胞信号,建立统计模型,计算口腔白斑恶变风险度.本实验将大于0.7定义为高恶变风险,小于0.5为低恶变风险,介于两者之间为中恶变风险,其中9.8％(8/82)口腔白斑病例为高恶变风险,7.3％(6/82)为中恶变风险,82.9％(68/82)为低恶变风险.82例口腔白斑患者平均随访时间为3.8年.其中1例口腔白斑伴轻度异常增生患者,恶变风险分析为高恶变风险,随访40个月后发生恶变.
结论:口腔黏膜脱落细胞DNA定量分析具有较高的敏感性和特异性,可以用于口腔癌的早期诊断及口腔白斑恶变风险定量分析,定量评估口腔白斑患者恶变风险,且为一种无创、可靠的、高特异性和敏感性的手段,具有临床应用价值.