【摘 要】
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该研究旨在探讨Hedgehog-Gli1(HH)信号在肾小管上皮细胞表型转化(EMT)和胶原累积中的作用及与TGF-β1 信号的对话机制.本实验通过体外培养大鼠肾小管上皮细胞NRK-52E,以溶剂作为对照组,以1～50 ng/ml 重组蛋白sonic hedgehog(Shh)或5 ng/ml TGF-β1 作为诱导组,以加入或不加入HH 信号特异性阻断剂环靶明5 μmol/L 为干预组.细胞培养
【机 构】
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温州医科大学附属第一医院 外科实验室 温州医科大学附属第一医院 医学检验中心
【出 处】
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中华医学会肾脏病学分会2014年学术年会
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该研究旨在探讨Hedgehog-Gli1(HH)信号在肾小管上皮细胞表型转化(EMT)和胶原累积中的作用及与TGF-β1 信号的对话机制.本实验通过体外培养大鼠肾小管上皮细胞NRK-52E,以溶剂作为对照组,以1～50 ng/ml 重组蛋白sonic hedgehog(Shh)或5 ng/ml TGF-β1 作为诱导组,以加入或不加入HH 信号特异性阻断剂环靶明5 μmol/L 为干预组.细胞培养24 h,采用ELISA、RT-PCR、免疫细胞荧光染色和Western Blot 等方法检测HH 信号相关分子(Ptch1、Smo 和Gli1)、TGF-β1、EMT 相关分子(Rac1 蛋白、肌成纤维细胞标志物α-SMA 和上皮细胞标志物E-cadherin)、Ⅲ型胶原mRNA 或蛋白的表达.结果发现外源性Shh 上调Smo 和Gli1 表达,抑制Ptch1 表达,继而激活HH 信号;HH 信号活化抑制肾小管上皮细胞E-cadherin 的表达,上调α-SMA、Ⅲ型胶原和TGF-β1的表达.环靶明干预后,Smo 表达下调,进而抑制HH 信号、EMT 和胶原累积,并下调TGF-β1 的表达.应用TGF-β1 诱导小管上皮细胞EMT,同时也上调HH 信号分子Smo 和Gli1 的表达,下调Ptch1 的表达,这提示TGF-β1 可诱导HH 信号活化.综上所述,HH 信号和TGF-β1 均参与了肾小管上皮细胞EMT 和胶原累积过程.HH 信号活化可促进TGF-β1 的表达,同时TGF-β1 能激活HH信号,推测TGF-β1 与HH 信号可能存在交叉对话以调控EMT 和胶原累积.
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