南方根结线虫Vap基因与水稻瘤矮病毒S11基因RNAi载体的构建

来源 :中国植物病理学会2010年学术年会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:hexingjie1980
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植物寄生线虫是世界农作物的重要病原物之一,寄主广泛为害极大,每年全世界农作物因植物寄生线虫为害造成的损失高达1250亿美元;水稻瘤矮病毒(Rice gall dwarf virus,RGDV)是中国、日本、朝鲜以及东南亚国家水稻上的一个重要病原,引起水稻瘤矮病,可导致水稻严重减产,甚至绝收.将来源于南方根结线虫Vap基因536 bp的片段与来源于水稻瘤矮病毒S11基因887 bp的片段连接成1423bp的大片段,作为正向序列,PCR扩增正向序列1~1173 bp部分,得到反向序列,其中正向序列比反向序列长250 bp.分别将正向序列、反向序列插入到预先准备好的含有3个酶切位点的pMDlB-T Simple载体上,获得含有Vap-S11正反向序列全长为2.6 kb的RNAi片段,将此片段插入到植物表达载体pCAMBIA-2300-ubi载体上,构建成RNAi载体,以期通过农杆菌介导的方法将其转入水稻,获得表达产生dsRNA、进而产生siRNA的转基因水稻,当被线虫取食或被RGDV侵染后沉默它们的靶基因,从而使转基因植物实现对南方根结线虫和水稻瘤矮病毒的抗性。
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