【摘 要】
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为获得比格犬β-防御素cBD1基因的表达产物,根据GenBank发表的犬β-防御素基因cBD1(Canis familiaris beta-defensin-like peptide 1)的序列设计引物,提取比格犬睾丸组织总RN
【机 构】
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青岛农业大学 动物科技学院,山东 青岛 266109
【出 处】
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中国畜牧兽医学会兽医病理学分会第二十次学术研讨会暨中国病理生理学会动物病理生理专业委员会第十九次学术研讨会
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为获得比格犬β-防御素cBD1基因的表达产物,根据GenBank发表的犬β-防御素基因cBD1(Canis familiaris beta-defensin-like peptide 1)的序列设计引物,提取比格犬睾丸组织总RNA,利用PCR扩增cBD1基因,然后将其克隆至pET-32a(+)载体,构建原核表达质粒pET-32a-cBD1,通过PCR、酶切鉴定和测序确认,将重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)中,并进行 IPTG诱导和His-Ni-resin纯化目的蛋白.经SDS-PAGE检测,获得了约28ku的表达产物,与预期大小的β-防御素cBD1分子量相一致.Western-blot分析表明,表达产物与抗His标签鼠单抗发生反应,显示重组蛋白获得了表达.结果表明,成功表达的cBD1为其蛋白活性验证及新型抗菌制剂的研究奠定了实验基础.
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