【摘 要】
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本研究以野生革耳(Panus rudis )漆酶(lcc)为对象，探讨漆酶的异源表达及酶学性质改良。首先在漆酶基因lcc的3端添加了编码5个氨基酸的酵母偏爱密码子，得到了突变体基因1ccT，将它
【机 构】
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军事医学科学院生物工程研究所,北京100071
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本研究以野生革耳(Panus rudis )漆酶(lcc)为对象，探讨漆酶的异源表达及酶学性质改良。首先在漆酶基因lcc的3端添加了编码5个氨基酸的酵母偏爱密码子，得到了突变体基因1ccT，将它连接到毕赤酵母表达载体pPICZaA中，转化毕赤酵母进行分泌表达，获得了重组野生型漆酶突变体LCCT。结果表明，LCCT的表观分子量约为61.6 kDa，以ABTS为底物时的最适反应pH值为2.6，最适温度为450Co氧化 ABTS的Km值为0.61 mmoUL，对应的Vmax为12.21 }mol/min;在60℃的半衰期为8min；在50℃保温1h保留酶活71％，50℃以下保温1h保留酶活均大于80％；且C一端序列对其活性有较大影响。诱导表达漆酶LCCT经过分子筛和离子交换层析得到电泳纯的漆酶蛋白LCCT, pH4.5时的比活力为3.68U/mg。
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