【摘 要】
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本研究用9日龄鸡胚大量繁殖H1N1流感病毒，甲醛灭活处理后，超速离心的方法制备灭活全病毒抗原。用上述抗原对5周龄Babl/c小鼠进行免疫，经脾细胞与骨髓瘤细胞融合、克隆化共筛选获
【机 构】
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中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室 实验动物与比较医学团队,黑龙江 哈尔滨150001
【出 处】
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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第十次学术研讨会
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本研究用9日龄鸡胚大量繁殖H1N1流感病毒，甲醛灭活处理后，超速离心的方法制备灭活全病毒抗原。用上述抗原对5周龄Babl/c小鼠进行免疫，经脾细胞与骨髓瘤细胞融合、克隆化共筛选获得7株单克隆抗体。病毒中和滴定试验初步筛选出了3株与流感病毒中和效果较好的单克隆抗体。以单抗杂交瘤细胞RNA反转录产物为模板，PCR成功扩增了轻(321 bp)、重链(360 bp)基因。选用(Gly4Ser),15肽序列的Linker序列，以重叠延伸拼接法成功组建了3条单链抗体基因，构建真核表达载体pCDNA31-ScFvo Lipoinfectamine2000转染MDCK细胞，在细胞水平上对3条单链抗体抗流感病毒活性进行了检测，间接免疫荧光实验结果表明单链抗体Q1-B1-BB具有一定的抑制流感病毒复制的能力，为以后小鼠模型验证其抗流感病毒活性奠定了基础，为抗流感转基因动物研究提供候选基因。
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