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目的建立应用高效液相色谱同时测定注射用水溶性维生素中的维生素H、叶酸及维生素B12含量的方法。方法采用Intersil(ODS-2)C18(4.6mm×150mm,5μm)色谱柱;以0.05mol.L-1磷酸二氢钾溶液(用磷酸调pH到3.0)-乙腈(10∶90)为流动相;流速为1mL.min-1;检测波长为210nm;进样量为10μL;柱温为30℃。结果谱图中维生素H、叶酸和维生素B12检测限分别为0.50,1.10和0.82μg.L-1;维生素H、叶酸和维生素B12分别在9.49~14.23,96.74~145.1和0.746~1.118mg.L-1内呈线性关系;平均回收率分别为100.96%(RSD=1.72%)、101.77%(RSD=0.14%)和101.27%(RSD=1.71%)。结论该方法简单、快速、灵敏度高、重复性好。