【摘 要】
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目的：本研究旨在探究马度米星铵对鸡心肌细胞的毒性作用,进一步阐释其毒性分子机制.方法：以原代培养的鸡心肌细胞为体外研究模型,20μM的z-VAD-fmk和500mM的NAC预处理细胞lh后,不同浓度的马度米星铵(0～5μg/mL)处理24h,显微镜观察细胞形态改变;MTT法分析细胞活性;DAPI染色观察细胞核形态;Annexin V-FITC/PI染色后行流式细胞术分析细胞凋亡率;RT-qPCR分
【机 构】
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南京农业大学动物医学院兽医药理与毒理学研究室,南京,210095
【出 处】
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中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十四次学术讨论会
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目的：本研究旨在探究马度米星铵对鸡心肌细胞的毒性作用,进一步阐释其毒性分子机制.
方法：以原代培养的鸡心肌细胞为体外研究模型,20μM的z-VAD-fmk和500mM的NAC预处理细胞lh后,不同浓度的马度米星铵(0～5μg/mL)处理24h,显微镜观察细胞形态改变;MTT法分析细胞活性;DAPI染色观察细胞核形态;Annexin V-FITC/PI染色后行流式细胞术分析细胞凋亡率;RT-qPCR分析凋亡基因变化;比色法检测凋亡蛋白活性;JC-1染色后经流式细胞仪和荧光显微镜分析线粒体膜电位变化;DCFH-DA染色后荧光显微镜观察ROS改变;比色法测定胞内GSH的含量.
结果：不同浓度的马度米星铵处理鸡心肌细胞24～72h,细胞损伤严重且细胞活性下降显著(P＜0.01);马度米星铵诱导细胞凋亡率升高,同时Caspase-3/8/9基因和蛋白表达水平均显著上调(P＜0.01),细胞内线粒体膜电位显著降低(P＜0.01);z-VAD-fmk预处理可削弱马度米星铵诱导的细胞凋亡和细胞毒性;NAC预处理未能改善马度米星铵引起的细胞凋亡但可降低细胞毒性.
结论：细胞凋亡介导了马度米星铵引起的鸡心肌细胞毒性,抑制细胞凋亡和和ROS产生有助于削弱马度米星铵的细胞毒性作用.
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